病理切片是診斷患者疾病的主要手段之一。病理切片制作過(guò)程復(fù)雜漫長(zhǎng)，影響病理切片制作質(zhì)量的因素眾多，常見(jiàn)問(wèn)題歸納如下：
一、固定標(biāo)本要充分及時(shí)：固定標(biāo)本是制片的第一個(gè)環(huán)節(jié)；固定時(shí)間不合適或者固定不正確的組織，在染色時(shí)常會(huì)出現(xiàn)較淺的核質(zhì)著色和輪廓不清，還會(huì)出現(xiàn)不同程度的片狀發(fā)白區(qū)；固定液的濃度要適宜，固定標(biāo)本的正確方法為：組織離體后快速放入適宜濃度的固定液中，固定液的量大約為標(biāo)本體積的7倍左右，盛放標(biāo)本的容器以不使標(biāo)準(zhǔn)變形為宜，大小適中。
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二、規(guī)范對(duì)標(biāo)本進(jìn)行取材：取材的原則為：保持病變的特征和器官的完整性。盡量修除無(wú)關(guān)組織，切面盡量做到平整，原則上小標(biāo)本要全部制片，大標(biāo)本宜在病變部位以及病變部位與正常組織交界處多處取材。
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三、及時(shí)更換試劑：在整個(gè)切片過(guò)程中，試劑的使用比較頻繁，試劑的濃度改變，會(huì)影響到組織的脫水、透明、浸蠟效果，有些試劑因?yàn)閾]發(fā)到別的試劑中，甚至?xí)?dǎo)致對(duì)病理組織的污染，從而產(chǎn)生誤診。因此，制片過(guò)程應(yīng)注意觀察試劑情況，根據(jù)標(biāo)本量的大小及時(shí)更換試劑，確保組織處理達(dá)到要求。
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四、組織包埋、切片：小塊組織要采用線狀包埋，大塊組織要在包埋時(shí)整理平整，以防出現(xiàn)切片不完全或片內(nèi)組織雜亂而造成診斷醫(yī)師誤診[3]。切片機(jī)應(yīng)隨時(shí)檢查刀口是否鈍化，隨時(shí)保持刀口鋒利以防出現(xiàn)切片斷裂、破碎的情況。切片力求完整，盡量將每塊組織切到最大面，以防發(fā)生漏診。
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五、 染色、封固要仔細(xì)，掌握好烤片條件：一般為60℃烤片0.5～1 h，過(guò)高溫度和過(guò)長(zhǎng)時(shí)間都會(huì)導(dǎo)致組織發(fā)黑，染色不清；脫蠟過(guò)程也相當(dāng)重要，如果出現(xiàn)脫蠟不干凈，那么就會(huì)出現(xiàn)切片不易著色和著色不勻的情況。鹽酸乙醇的分化是影響染色效果的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。分化不足和過(guò)度都會(huì)導(dǎo)致染色失敗。樹(shù)膠的稠度也應(yīng)適中，樹(shù)膠過(guò)稀過(guò)多會(huì)發(fā)生溢膠，樹(shù)膠過(guò)稠過(guò)少又會(huì)出現(xiàn)封片不全或空泡。完成切片固封后，應(yīng)及時(shí)貼好標(biāo)簽，防止出現(xiàn)混淆事故。
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六、加強(qiáng)操作人員的工作責(zé)任心，減少因人為因素導(dǎo)致差錯(cuò)事故及壞片的發(fā)生。
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病理組織石蠟切片注意事項(xiàng)：
一、組織固定取材
臨床所取標(biāo)本要新鮮，否則細(xì)胞內(nèi)溶酶體會(huì)破裂，造成細(xì)胞自溶。組織固定液多選用10% 中性福爾馬林，其有效成分為甲醛，甲醛易揮發(fā)，使得福爾馬林的效用會(huì)越來(lái)越低，所以福爾馬林最好現(xiàn)配現(xiàn)用; 固定液體積要超過(guò)標(biāo)本的10～ 20 倍，否則固定不充分，影響染色; 固定標(biāo)本的容器要以使標(biāo)本不變形為宜；取材時(shí)，除嚴(yán)格按照病理標(biāo)本取材操作規(guī)范外，小標(biāo)本一般全取，大標(biāo)本在去除不必要的組織后，要特別注意病變部位與正常組織交界處；取材切片觀察面要平整，否則組織經(jīng)脫水后變韌，導(dǎo)致組織包埋時(shí)不能壓平于包埋盒中，切片時(shí)修整蠟塊很繁瑣。
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二、脫水包埋
現(xiàn)組織多采用程序化脫水浸蠟，所以要根據(jù)標(biāo)本的多少及大小及時(shí)更換脫水機(jī)內(nèi)試劑，否則會(huì)影響脫水效果，使組織與蠟不能相溶，無(wú)法制作出合格的組織蠟塊。條件允許的情況下可根據(jù)組織標(biāo)本的不同選擇合適的石蠟，組織韌性大選擇高熔點(diǎn)石蠟，組織軟選取低熔點(diǎn)石蠟。包埋時(shí)，組織要充分壓平于包埋模底部，以保證組織的預(yù)期觀察切面在同一水平; 先向包埋盒中灌滴少許液體石蠟，此步驟可使成型蠟塊底部光滑平整，再將組織觀察面壓平于包埋盒底部，組織擺放緊湊但不重疊。為使包埋組織的蠟塊快速凝固，一般先將浸液體蠟的包埋盒置于冷凍臺(tái)上，蠟塊在置于冷凍臺(tái)上后，應(yīng)在蠟大部分或完全凝固后，再移動(dòng)包埋盒; 若蠟塊未完全凝固，而移動(dòng)了包埋盒，成型蠟塊底部平整度相差甚遠(yuǎn)，有的凝固蠟塊底部平整，有的蠟塊底部不平整，可致小標(biāo)本在修片的過(guò)程中被浪費(fèi)。
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三、切片
切片時(shí)常見(jiàn)問(wèn)題及常用解決方法如下:
(1) 切片橫向褶皺過(guò)多，不能成帶。原因: 蠟塊溫度過(guò)高; 切片刀變鈍; 切片刀邊緣粘有少量石蠟。解決方法: 將蠟塊重新放置冰袋或冷凍盒上，使蠟塊降溫; 更換切片刀的位置，或換新的切片刀; 或用水沾濕紗布，順切片刀刀口方向，輕輕擦拭切片刀。
(2) 切片上有位置固定的一道或幾道裂縫或裂紋。原因: 切片刀有小缺口; 蠟塊內(nèi)有雜質(zhì)或體積較小的似骨( 鈣) 化性較硬的組織; 包埋時(shí)蠟塊不均勻凝固。解決方法: 移動(dòng)切片刀或更換新的切片刀; 用少量鹽酸軟化硬的鈣化性組織; 重新包埋蠟塊。
(3) 切片上有位置不定的數(shù)道小裂縫或裂紋。原因: 蠟塊溫度過(guò)高; 切片刀變鈍。解決方法: 將蠟塊重新放置冰袋或冷凍盒上，使蠟塊降溫; 更換切片刀的位置，或更換新的切片刀。
(4) 切出的蠟條明顯向一側(cè)彎曲變形。原因: 彎曲處蠟塊質(zhì)地不均，蠟塊未修整好，邊緣毛糙等; 彎曲處切片刀變鈍。解決方法: 重新修整蠟塊; 移動(dòng)切片刀; 冷凍蠟塊，蠟塊質(zhì)地稍變硬后也可以使彎曲變小。
(5) 切片厚薄不均，或是每固定幾片后，切出一張完整的片子。原因: 蠟塊過(guò)硬或過(guò)大; 蠟塊夾持器或切片刀松動(dòng); 切片機(jī)微動(dòng)失靈，不能調(diào)節(jié)出正確的切片厚度。解決方法: 組織塊過(guò)硬可重新取材包埋，過(guò)大可重新包埋; 調(diào)整機(jī)器，上緊刀片; 修理機(jī)器。
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四、漂片注意事項(xiàng)
漂片溫度選擇比蠟塊熔點(diǎn)低10 ℃即可。溫度過(guò)高會(huì)使蠟條產(chǎn)生數(shù)目不等的小氣泡。
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五、烤片注意事項(xiàng)
烤片時(shí)溫度與時(shí)間的選擇范圍廣，可從37 ℃烤箱烤干1 天至75 ℃烤箱烤干20 min，可以根據(jù)不同目的需要，確定烤片時(shí)間和溫度，或是依石蠟熔點(diǎn)來(lái)確定，一般將溫度控制比石蠟熔點(diǎn)高10 ～ 15 ℃。
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六、 染色注意事項(xiàng)
(1) 組織脫蠟透明等過(guò)程采用物質(zhì)分子相似相溶原理，試劑有效成分容易減少，所以脫蠟試劑要及時(shí)更換，若脫蠟不充分，會(huì)使切片染色不均勻; 因乙醇、二甲苯等易揮發(fā)，故在操作完成時(shí)，應(yīng)及時(shí)封蓋，溶液濃度降低會(huì)影響洗片效果;
(2) 染色時(shí)，鹽酸乙醇分化步驟尤其重要，分化的目的是使胞核染色，而無(wú)背景色。明礬蘇木精性質(zhì)使其在酸性溶液中呈現(xiàn)紅色，在堿性溶液中呈現(xiàn)藍(lán)色。在鹽酸乙醇分化時(shí)，切片由深藍(lán)變?yōu)榉奂t色時(shí)，應(yīng)停止分化。分化時(shí)，有經(jīng)驗(yàn)者可以肉眼觀察切片至粉紅色時(shí)終止分化，初學(xué)者可鏡下多次觀察切片，至切片除胞核外，無(wú)其他背景著色時(shí)，停止分化;或是依據(jù)鹽酸乙醇濃度，確定分化時(shí)間，試劑初配制時(shí)，鹽酸乙醇濃度高，分化時(shí)間短，反之則分化時(shí)間延長(zhǎng)。切片分化完成后，將切片移至弱堿性的溶液中返藍(lán)，一般采用自來(lái)水，或是溫度在50 ℃的自來(lái)水中，因其本身為弱堿性，且取用方便，所以被廣泛使用。
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七、封片注意事項(xiàng)
(1) 需吹干或烤干切片上水分，否則鏡下觀察時(shí)有一層白霧，導(dǎo)致細(xì)胞輪廓不清楚;
(2) 病理組織切片HE 染色一般采用中性樹(shù)膠封片，封片時(shí)以無(wú)氣泡為準(zhǔn)，否則會(huì)影響鏡下
觀察; 常用24 mm × 32 mm 大小的蓋玻片，只需用一次性的巴氏吸管滴二滴中性樹(shù)膠即可，過(guò)少則致封片不完全，過(guò)多則致中性樹(shù)膠外溢。
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